NIBSC 06/202 HPV16型DNA國際標準品的研究使用

品牌：英國NIBSC標準品

CRM code（貨號）：06/202

英文名稱：Human Papillomavirus (HPV) Type 16 DNA (1st International Standard)

描述：HPV16型DNA國際標準品

產(chǎn)品用途：

用于核酸檢測的di一個HPV 16型（HPV16）DNA國際標準包括冷凍干燥的重組質(zhì)粒pBR322，其含有通過其獨te的BamH1位點克隆的全長HPV16 DNA（Quint等人，2006）。該標準是在純化的人類基因組DNA的背景下配制的，在0.5ml等分試樣中凍干，并在-20°C下儲存。該材料在一項涉及19個實驗室的國際合作研究中進行了校準（Wilkinson等人，2010）。該國際標準包含第三方專有的材料，應僅用于校準HPV-16 DNA擴增和檢測的內(nèi)部或工作標準。國際標準不得用于任何其他目的，使用后應丟棄。

di一個HPV16 DNA國際標準（NIBSC代碼06/202）的單位為每安瓿5 x 10^6國際單位（IU）。

可追溯性聲明：

2008年1月世界衛(wèi)生組織會議（世界衛(wèi)生組織會議報告，2008年）提出，使用HPV16 DNA國際標準的說明包括用于確定制定該國際標準所用的塊狀材料的理論HPV16基因單體當量（GEq）的計算和假設，從而證明1個IU相當于1個GEq。因此，世界衛(wèi)生組織di一個HPV16 DNA國際標準的最終單位仍然是IU，而可追溯性聲明允許用戶將IU等同于GEq。

重組HPV16質(zhì)粒儲備制劑的DNA濃度測定在新墨西哥大學Cosette Wheeler博士的實驗室進行。通過260nm處的吸光度以及使用Picogreen測定法（Invitrogen Corporation，USA）的熒光分光光度法測定DNA濃度。兩次DNA測量之間的相關(guān)系數(shù)為0.95或更高。將10ng HPV16質(zhì)粒DNA/ul提供給NIBSC，用于配制后續(xù)冷凍干燥的塊狀材料。UNM實驗室還向NIBSC提供了一份聲明，表明HPV16的1.0 x 10 GEq/ml等于1.17 ng/ul。因此，10 ng HPV-16質(zhì)粒DN/A/ul質(zhì)粒制備相當于8.547 x 101'HPV-16 GEq/ml。NIBSC在制定di一個HPV 16型DNA國際標準時使用了這些數(shù)據(jù)。

di一個HPV 16型DNA國際標準（NIBSC代碼06/202）的散裝材料配方：

在NIBSC，根據(jù)以下公式制備散裝HPV16質(zhì)粒DNA材料：

HPV GEq/ml散裝材料=（HPV GEq/ml質(zhì)粒原液x體積質(zhì)粒原液）/體積散裝材料。

因此，HPV16 GEq/ml散裝材料=（8.547 x 101 HPV-16 GEq/ml質(zhì)粒

庫存）x（0.02223 ml HPV-16質(zhì)粒庫存）/1900 ml HPV-16散裝材料=1.0 x 10'HPV-16 GEq/ml散裝材料隨后將HPV-16 DNA散裝材料冷凍干燥成0.5 ml等分試樣。

將IU等同于HPV16 DNAdi一國際標準的GEq需要某些假設：1）HPV16的1.0 x 101'GEq/ml等于1.17 ng/ul。2）凍干后HPV16 DNA的活性沒有損失。3）重組HPV-16質(zhì)粒DNA準確地模擬了生物樣本中HPV16病毒DNA的活性。

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